近期一则《方舟子爆料：普洱茶致癌》的文章中认为普洱茶中有各种霉菌，其中必定存在有对人体有害的黄曲霉毒素，引起社会各界人士的关注，为此各方检测机构以及知名专家也出面来为普洱茶辟谣，作为一直致力于真菌毒素检测的北京美正检测技术有限公司马上从市场上来购买了一批普洱茶，来检测其中的黄曲霉毒素毒素的污染情况，一探究竟。

1、材料与方法

北京美正检测技术有限公司共从延庆、京东和云南各地买了23份普洱茶。

黄曲霉毒素B1 标准品(20μg/mL,美国Sigma 公司)；黄曲霉毒素免疫亲和柱(北京华安麦科生物技术有限公司)；甲醇、乙腈(提取用):分析纯,国药集团化学试剂北京有限公司；甲醇(液相用):色谱级,美国J.T.Baker 公司。

1.2仪器设备
      高效液相色谱仪（岛津LC-20AT），光化学衍生器（北京华安麦科生物技术有限公司）。

1.3 仪器条件
     色谱柱：C18，5μm，4.6×250mm；流动相：甲醇: 水（55:45）；流速：0.8mL/min；柱温：40℃；进样量：20µL；荧光检测器：激发波长：360nm，发射波长：440nm；柱后光化学衍生法：光化学衍生器。

1.4 方法对比

1.4.1 提取

称取粉碎后的样品 5.0 g 于 50 mL具塞离心管中，分别加入25 mL 乙腈-水 ( 80∶20， V /V)，25mL 甲醇-水（70:30，V/V）和25mL 纯甲醇，2500rpm/min，涡旋震荡10min，4000rpm/min离心5min后，上清液备用。取10.0 mL滤液加入40.0 mL 0.1%吐温稀释，用玻璃纤维滤纸过滤 1 次～ 2 次，至滤液澄清，备用。

1.4.2 净化
       将免疫亲和柱连接于10.0 mL注射器下。准确移取25.0 mL样品提取液注入注射器中，将空气压力泵与注射器连接，调节压力使溶液以约 3-4mL /min 流速缓慢通过免疫亲和柱，直至 2 mL ～ 3 mL 空气通过柱体。用10mL水洗涤两次后，准确加入1.0 mL色谱级甲醇洗脱，流速为1 mL /min ～ 2 mL /min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，经 0.22 μm滤膜过滤，供 HPLC 分析用。

1.5 标准溶液的配制 

将黄曲霉毒素B1标准溶液依次稀释成 20.0 ng /mL，10.0 ng /mL，5.0 ng /mL，2.0 ng /mL，1.0 ng /mL，0.5 ng /mL，进样分析，以标准系列溶液的峰面积对浓度绘制黄曲霉毒素B1的标准曲线。

2、结果与分析

2.1 标准曲线及检出限
       在 1.3 所示的条件下对黄曲霉毒素 B1 标准系列进行测定，以标准系列的浓度对应峰面积制作标准曲线，在配制的浓度范围内，黄曲霉毒素 B1 具有良好的线性关系，线性方程为y=41252.5x-1282.07，相关系数 R2 为1.0，方法检出限为 0.1 μg/kg。

 本次随机选取三种普洱茶进行前处理方法的对比，数据显示，80%乙腈的提取效果最好，随后我司利用80%乙腈的方法将收集到的所有的普洱茶进行了黄曲霉毒素B1的检测。